ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn))是一種常用于檢測(cè)蛋白質(zhì)濃度的技術(shù)。通過特異性抗體結(jié)合目標(biāo)分子,可以定量檢測(cè)樣品中的IFN-γ濃度。
γ干擾素(IFN-γ)是免疫系統(tǒng)中重要的調(diào)節(jié)因子,可促進(jìn)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。在許多疾病和感染中,IFN-γ濃度的變化與疾病發(fā)展密切相關(guān)。因此,檢測(cè)IFN-γ的水平對(duì)于診斷疾病、監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展以及評(píng)估藥物療效具有重要意義。
γ干擾素ELISA試劑盒是一種專門用于檢測(cè)IFN-γ的ELISA試劑盒。該試劑盒包含預(yù)涂有特異性抗IFN-γ的微孔板、標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)抗體、顯色底物和停止液等組成部分。在使用前,需要將試劑盒和樣品升溫至室溫,并按照說明書操作。
盡管γ干擾素elisa試劑盒的操作過程看似簡單,但沒做到位的話就會(huì)影響試驗(yàn)的作用。所以γ干擾素elisa試劑盒在試驗(yàn)過程中這幾點(diǎn)非常重要:
1、重要的洗刷:
不充分的洗刷會(huì)導(dǎo)致差異和高布景,從而帶來不抱負(fù)的試驗(yàn)結(jié)果。假如未結(jié)合的材料殘留在微孔板中,那么它會(huì)添加布景噪音。有必要的話,可添加洗刷液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反響。假如布景過高,置疑洗刷不行時(shí),能夠測(cè)驗(yàn)添加洗刷次數(shù)。
2、關(guān)鍵的關(guān)閉:
關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的時(shí)機(jī)。假如布景過高,置疑關(guān)閉不充分,那么能夠測(cè)驗(yàn)運(yùn)用更高濃度的關(guān)閉液,或適當(dāng)延伸關(guān)閉時(shí)間。
現(xiàn)在主要有兩種類型的關(guān)閉液:蛋白和非離子型去污劑。ELISA試劑盒運(yùn)用的類型須取決于多個(gè)因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測(cè)試劑。好的關(guān)閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。
3、抗體濃度須優(yōu)化:
假如試劑稍有不同,則或許需求優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會(huì)添加布景。為了防止這一點(diǎn),切勿運(yùn)用過多的一抗或二抗。
4、檢測(cè)試劑要適量:
切勿運(yùn)用過多的檢測(cè)試劑。假如濃度過高,ELISA試劑盒或許未正確稀釋,則會(huì)導(dǎo)致高布景。也不要顯色過度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。
只要確保每一步操作都做到位,才會(huì)出現(xiàn)的試驗(yàn)結(jié)果。所以ELISA試驗(yàn)的每一步都很重要,不能夠漫不經(jīng)心。